全自動定氮儀檢測酒糟蛋白質(zhì)含量的操作步驟
來源： http://m.fleetco2.com/ 類別：實(shí)用技術(shù) 更新時間：2015-03-31 閱讀次
釀酒后的酒糟含有大量蛋白質(zhì)、纖維素等，可作為開發(fā)蛋白質(zhì)的原料。目前常用于檢測蛋白質(zhì)的方法主要有4種：全自動定氮儀法、雙縮脲法、Folin-酚試劑法和紫外吸收法。下面就先簡單的說說全自動定氮儀方法的操作不走吧。
首先是樣品的提取，精確稱取1g左右酒糟粉末樣品2份于高腰燒杯中，力2gKZSO4-CuS04"SH20混合物及SOmL消化液。用電爐小火加熱，溶液呈棕黃色，且有泡沫產(chǎn)生。繼續(xù)加熱，產(chǎn)生大量泡沫，溶液呈淺黃綠色并有大量SOZ白煙產(chǎn)生，待酒糟焦化完全，取下燒杯，稍冷，加入2-3滴30%的H202溶液，繼續(xù)消化至白煙消失，溶液變?yōu)槌吻宓木G色，即消解完成。將消解液稍冷(以防結(jié)晶)后轉(zhuǎn)移至離心管，用二次蒸餾水洗滌燒杯2-3次，洗液一并注入離心管中，于2500r/min下離心15min，將離心液轉(zhuǎn)移至SOmL容量瓶，定容，備用。按同樣方法消化試劑空白液。
其次是，氨氣發(fā)生與吸收：
1)取250mL錐形瓶數(shù)個，分別加入SmL2%硼酸和2滴混合指示劑備用。
2)關(guān)閉冷凝水，打開自由夾，使蒸汽發(fā)生器與大氣相通。將一個盛有硼酸和指示劑的錐形瓶放在冷凝器下，使冷凝器下端浸沒在液體內(nèi)。
3)用吸量管取S.OOmL酒糟樣品消化液，細(xì)心地由加樣室下端加入反應(yīng)室，隨后加入7.OmL30%的NaOH，用少量蒸餾水洗滌加樣室，關(guān)閉自由夾，在加樣漏斗中加入少量水做水封。關(guān)閉自由夾(圖中2)，緩慢打開冷凝水。用酒精燈加熱蒸汽發(fā)生器，當(dāng)觀察到錐形瓶中溶液由酒紅色變?yōu)榫G色時，蒸餾約lOmin后，移開錐形瓶，使冷凝器下端離開液而約1cm，同時用少量蒸餾水洗滌冷凝管口外側(cè)，繼續(xù)蒸餾2min-3min，取下錐形瓶。
C4)蒸餾完畢后，移開酒精燈，使反應(yīng)室中廢液溢出。全自動定氮儀待冷卻至室溫后，將儀器取下，打開自由夾，將蒸汽發(fā)生器內(nèi)的全部廢水放出，用蒸餾水清洗反應(yīng)室2-3次。組裝裝置，接通冷凝水，按如前所述方法洗滌蒸餾器2-3次，準(zhǔn)備下一次蒸餾。
首先是樣品的提取，精確稱取1g左右酒糟粉末樣品2份于高腰燒杯中，力2gKZSO4-CuS04"SH20混合物及SOmL消化液。用電爐小火加熱，溶液呈棕黃色，且有泡沫產(chǎn)生。繼續(xù)加熱，產(chǎn)生大量泡沫，溶液呈淺黃綠色并有大量SOZ白煙產(chǎn)生，待酒糟焦化完全，取下燒杯，稍冷，加入2-3滴30%的H202溶液，繼續(xù)消化至白煙消失，溶液變?yōu)槌吻宓木G色，即消解完成。將消解液稍冷(以防結(jié)晶)后轉(zhuǎn)移至離心管，用二次蒸餾水洗滌燒杯2-3次，洗液一并注入離心管中，于2500r/min下離心15min，將離心液轉(zhuǎn)移至SOmL容量瓶，定容，備用。按同樣方法消化試劑空白液。
其次是，氨氣發(fā)生與吸收：
1)取250mL錐形瓶數(shù)個，分別加入SmL2%硼酸和2滴混合指示劑備用。
2)關(guān)閉冷凝水，打開自由夾，使蒸汽發(fā)生器與大氣相通。將一個盛有硼酸和指示劑的錐形瓶放在冷凝器下，使冷凝器下端浸沒在液體內(nèi)。
3)用吸量管取S.OOmL酒糟樣品消化液，細(xì)心地由加樣室下端加入反應(yīng)室，隨后加入7.OmL30%的NaOH，用少量蒸餾水洗滌加樣室，關(guān)閉自由夾，在加樣漏斗中加入少量水做水封。關(guān)閉自由夾(圖中2)，緩慢打開冷凝水。用酒精燈加熱蒸汽發(fā)生器，當(dāng)觀察到錐形瓶中溶液由酒紅色變?yōu)榫G色時，蒸餾約lOmin后，移開錐形瓶，使冷凝器下端離開液而約1cm，同時用少量蒸餾水洗滌冷凝管口外側(cè)，繼續(xù)蒸餾2min-3min，取下錐形瓶。
C4)蒸餾完畢后，移開酒精燈，使反應(yīng)室中廢液溢出。全自動定氮儀待冷卻至室溫后，將儀器取下，打開自由夾，將蒸汽發(fā)生器內(nèi)的全部廢水放出，用蒸餾水清洗反應(yīng)室2-3次。組裝裝置，接通冷凝水，按如前所述方法洗滌蒸餾器2-3次，準(zhǔn)備下一次蒸餾。
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